Флуоресцентная микроскопия и визуализация клеток

Расположение: CRF212

Детали микроскопа

• Изготовленный на заказ инвертированный микроскоп Olympus IX83 со сверхбыстрым моторизованным XY-предметом Martzhauzer с пьезо-Z-вставкой.
• Мультиспектральный светодиод Cool LED PE-300Ultra LED (широкое поле) и светодиод Lumencor PEKA (яркое поле)
• Силиконовое масло 10X/0.4NA, 30X/1.05NA, силиконовое масло 40X/1.25NA, силиконовое масло 60X/1.3NA, силиконовое масло 100x/1.35NA
• DIC поддерживает оптику с увеличением от 30 до 100 раз.
• Olympus Real Time Controller для точной по времени синхронизации камеры и возбуждения
• Вращающаяся дисковая головка с двойной камерой Yokogawa CSU-W1 и устройством смены магнитов SD-SR 3X
• Утонченные sCMOS-камеры Hamamatsu ORCA-Fusion третьего поколения
• 4 отдельные лазерные линии OBIS: 405 нм (50 мВт); 488 нм (100 мВт); 561 нм (100 мВт) и 640 нм (100 мВт)
• 4-цветное изображение (2 канала одновременно) Эмиссионные фильтры на полувысоте: синий (447/60); ЗЕЛЕНЫЙ (525/50); RED 607/36 и Far RED (685/40)
• Неразрушающая фотосъёмка ИК-автофокусировка ZDC2 для чрезвычайно быстрой одиночной или непрерывной автофокусировки
• Верхний инкубатор для визуализации живых клеток Tokai Hit WSKMX
• Программное обеспечение для получения изображений Olympus cellSens Dimension
• Постобработка с поддержкой графического процессора, предоставляемая Huygens Essentials для восстановления изображений (деконволюция)

Возможные применения

• Высокоскоростная многомерная визуализация живых клеток в случаях, когда фототоксичность вызывает беспокойство
• 3D-съемка, замедленная съемка и мозаика
• Объемные образцы, такие как сфероиды/органоиды, рыбки данио и эмбрионы дрозофилы.

Расположение: CRF219

Детали системы

• Индивидуальный инвертированный микроскоп Olympus IX83 с пьезосканирующим столиком Asylum 3D XYZ
• Мультиспектральная светодиодная лампа Excelitas Turbo (широкое поле) и галогенная лампа (яркое поле)  
• Масляный иммерсионный объектив 10X/0.3 NA, 20X/0.7 NA и 100X/1.4 NA
• Монохромная ПЗС-камера Olympus XM10 
• АСМ-головка Asylum MFP Origin с увеличенным диапазоном перемещений для биологических препаратов
• Программное обеспечение Asylum Research для управления АСМ
• Программное обеспечение Olympus CellSens для управления световой микроскопией
• BioHeater для работы с живыми клетками/тканями
• Тренировочные зонды предоставляются, пока есть в наличии!
• Чашки, совместимые с АСМ: нижние камеры с крышкой WillCo (Ted Pella cat # 14025-20) и чашки для культур из полистирола BD Falcon (# 351006)
• Атомарно-плоские поверхности (слюда или ВОПГ) для сканирования с высоким разрешением можно найти на сайте Ted Pella.com — обращайтесь за помощью.

Возможные применения

• Режим переменного контакта (AC), также известный как режим постукивания, для визуализации в нанометровом масштабе в сухих или влажных препарах.
• Режим контакта для измерения механической силы (модуль упругости, адгезия, вдавливание и картирование силы) в сухих или влажных препарациях 

Расположение: CRF216

Детали микроскопа

• Инвертированный микроскоп Leica DMi8 с моторизованным столиком XY
• Металлогалогенная люминесцентная лампа и галогенная лампа
• Объективы 10X, 20X Oil, 25X Water, 63X Water DIC и 63X Oil DIC
• Лазерное возбуждение для PA-GFP, DAPI, CFP, YFP, FITC, родамина и Cy5-подобных флуорофоров
• Настраиваемый и импульсный лазер белого света: 470-670 нм
• Два дополнительных лазера: лазерный диод 405 нм и мультиаргоновый (линии 458, 477, 488, 514 нм)
• Шесть детекторов: 2 гибридных спектральных детектора * (HyD); 2 Spectral SMD ** HyD, 1 стандартный Spectral PMT и 1 переданный PMT (внешний)
• Гальво Z-этап
• Резонансный сканер
• Модуль флуоресцентной пожизненной микроскопии (FLIM) Pico Harp 300
• Программное обеспечение для сбора данных LASX
• SymphoTime64 (PicoQuant) Программное обеспечение FLIM
• Программное обеспечение Huygens Deconvolution
• Инкубатор Tokai Hit Stage Top для визуализации живых клеток

* HyD - это специализированные детекторы, использующие фотокатоды GAsP и лавинные фотодиоды.

** Детекторы одиночных молекул (SMD)

Возможные применения

• Фиксированные образцы, закрепленные на стандартном предметном стекле с покровными стеклами №1.5.
• Образцы живых клеток (многолуночный LabTekII # 1.5 или дно крышки 35 мм (# 1.5))
• FLIM FRET (фиксированные или живые клетки)
• Отбеливание акцепторов FRET (фиксированное)
• Сенсибилизированная эмиссия FRET (живые клетки)
• FRAP (живая клетка)
• 3D-захват (Z-стеки) и покадровая съемка
• Мультиспектральное разделение
• Многоплановое сканирование плитки большой площади
• Сверхразрешение за счет обработки восстановления изображения (~ 130 нм)

Расположение: CRF226

Детали микроскопа

• Инвертированный микроскоп Zeiss AxioObserver с моторизованным столиком XY
• Металлогалогенные люминесцентные лампы и галогенные лампы
• 10x, 20x, 40x масляные, 63x масляные и 63x водные иммерсионные объективы
• DIC доступен с объективами 10x, 20x, 40x и 63x
• Лазерное возбуждение для PA-GFP, DAPI, CFP, YFP, FITC, родамина и Cy5-подобных флуорофоров
• Четыре твердотельных лазера: 405 нм, 488 нм, 561 нм, 640 нм
• Канальное и спектральное детектирование - детекторы GaAsP PMT
• Одновременное обнаружение в 3 каналах доступно в режиме канала
• Матричный детектор Airyscan для увеличения разрешения XY в 1.7 раза
• Детектор проходящего света
• Система инкубации живых клеток: контроль температуры, влажности и CO2
• Программное обеспечение Zen Blue Image Acquisition

Возможные применения

• Фиксированные образцы, закрепленные на стандартном предметном стекле с покровными стеклами №1.5.
• Образцы живых клеток (многолуночный LabTekII # 1.5 или дно крышки 35 мм (# 1.5))
• Отбеливание акцепторов FRET (фиксированное)
• Сенсибилизированная эмиссия FRET (живые клетки)
• FRAP (живая клетка)
• 3D-захват (Z-стеки) и покадровая съемка
• Мультиспектральное разделение
• Многоплановое сканирование плитки большой площади
• Сверхразрешение за счет обработки восстановления изображения (~ 130 нм)

Расположение: CRF226

Детали микроскопа

• Индивидуальный инвертированный микроскоп Olympus IX83 с моторизованным XY-столиком ASI и пьезо-Z-образной вставкой.
• Многоспектральный светодиод Excelitas Turbo (широкое поле) и белый светодиод Lumencor (яркое поле)  
• 20x / 0.8NA масляные, 60x / 1.5NA масляные TIRF, 60x / 1.2NA водяные и масляные 100x / 1.4NA
• DIC поддерживает оптику 60x и 100x.
• Olympus Real Time Controller для точной по времени синхронизации камеры и возбуждения
• 4-х лазерный прожектор MITICO TIRF для независимой глубины проникновения
• 4 отдельные лазерные линии для TIRF: 405 нм (100 мВт); 488 нм (100 мВт); 561 нм (100 мВт) и 640 нм (140 мВт)
• Возможна прямая стохастическая оптическая реконструирующая микроскопия (dSTORM), фотоактивированная локализационная микроскопия (PALM) и получение изображений с помощью листов с наклонной ламинарной оптикой (HILO)
• Камера Hamamatsu Fusion sCMOS и разделитель изображений Geminini W-View для одновременного получения 2-х цветных живых клеток.
• Не фотодеструктивный ИК-автофокус ZDC2 для чрезвычайно быстрой съемки одного кадра или непрерывной автофокусировки 
• Нагреватель объективов BiopTechs для кратковременного применения живых клеток
• Программное обеспечение для получения изображений Olympus cellSens Dimension

Возможные применения

• Фиксированные образцы с покровными стеклами # 1.5H
• Образцы живых клеток (LabTekII # 1.5H многолуночный или дно крышки 35 мм (# 1.5H))
• 3D-захват (Z-стеки) и покадровая съемка
• Конкретные области применения включают обнаружение одиночных молекул TIRF на живых клетках, HILO, 2D dSTORM или PALM. 
• Постобработка с поддержкой графического процессора, предоставляемая Huygens Localizer

Расположение камеры: CRF218

Детали микроскопа

• Инвертированный инвертированный микроскоп Olympus IX-71
• Люминесцентная лампа ртути и галогенная лампа пропускания
• Монохроматор - диапазон возбуждения 350-670 нм
• Лазеры: 405 нм, 488 нм, 520 нм и 642 нм
• Объективы TIRF 20x, 60x H2O, 100x Oil, 150x Oil
• Флуоресцентные фильтры для квантовых точек, DAPI, FITC и Rhod-подобных флуорофоров, Fura-2, Indo-1
• Программное обеспечение Andor IQ Image Acquisition
• Нагреватель для объективов и система инкубации живых клеток с патологическими устройствами с CO2, теплом, влажностью
• XYZ моторизованная сцена
• Andor iXon EM-CCD камера
• Opti-split (двойной) разделитель изображений

Возможные применения

• Фиксированный образец на предметных стеклах
• Визуализация живых клеток с обогревателем объектива
• Отслеживание отдельных частиц
• Флуоресценция полного внутреннего отражения (TIRF)
• Соотношение-метрическая визуализация (двойное возбуждение / одиночное излучение или двойное излучение одиночного возбуждения)
• Живые клетки в культуре
• Широкопольная флуоресценция - с монохроматором возможно множество флуорофоров
• Z-стеки и временные ряды

Расположение камеры: CRF212

Детали микроскопа 

• Инвертированный флуоресцентный микроскоп Zeiss AxioObserver
• Монохромная камера Hamamatsu ORCA Flash4.0v2 sCMOS (100 кадров в секунду при полном разрешении 2048x2048)
• Металлогалогенные люминесцентные лампы и галогенные лампы
• 10x, 20x, 63xDIC Oil и 100x масляные объективы
• Фазовый контраст для объективов 10x и 20x
• Наборы флуоресцентных фильтров включают: DAPI, FITC, Rhodamine / TRITC / Cy3, Texas Red и Cy5.
• ДИК доступен с объективами 63x
• Нагреватель объектива (водяной объектив 63x) o Моторизованная насадка для Z-образной укладки
• Моторизованный столик XY для получения многопозиционных изображений (покадровая съемка с фиксированными или живыми ячейками)
• ПО для создания изображений SlideBook6

Возможные применения 

• Фиксированный образец на предметных стеклах
• Живые клетки в покровном стекле / нагревание с помощью нагревателя объектива
• ДИК (неконфокальный) с объективами 63x, объединенный с флуоресценцией или отдельно
• Z-стеки, монтаж и визуализация временных рядов

Расположен в CRF224 и CRF226

Software

• Научная объемная визуализация с использованием деконволюции Гюйгенса (1)
• Слайд-книга (1)
• СтереоИсследователь (1)
• Нейролуциды (1)
• LASX (конфокальный Leica) (1)
• IQTL (анализ сканера тайфуна) (1)
• Дзен (2)  
• ЛСМ510 (2)
• Программное обеспечение Nuance для получения спектральных изображений (2)

Параметры анализа

• Совместная локализация
• деконволюция
• Спектральное разделение
• Анализ интенсивности
• Морфологический анализ
• 3D рендеринг
• Подсчет объектов
• Отслеживание частиц
• Подготовка к публикации

Расположен в CRF214.

Typhoon FLA 7000 - это быстрый и универсальный лазерный сканер для приложений биомолекулярной визуализации, в том числе:

• чувствительные и количественные измерения радиоизотопных меток
• хемифлуоресцентный вестерн-блоттинг
• одиночная флуоресценция (видимое возбуждение)
• документирование колориметрических пятен (например, гелей, окрашенных кумасси синим и серебристым)

Расположен в CRF214.

Li-Cor Odessey Fc - это сканер ближнего инфракрасного диапазона (680 нм и 740 нм) для приложений биомолекулярной визуализации, включая:

• чувствительные и количественные измерения хемилюминесцентных вестерн-блотов
• документирование колориметрических пятен (например, гелей, окрашенных кумасси синим и серебристым)

Zeiss AxioObserver - Монохромная камера Hamamatsu ORCA Flash4.0v2 sCMOS: 7 долларов в час

Вращающийся диск Yokogawa: 30 долларов в час.

Leica TCS-SP8/FLIM: 50 $ / час

Цейсс LSM800: 45 $ / час

Olympus IX71 Single Particle Tracking/Ratio-Metric Microscope (Rm. 218): $25/час

Микроскоп Olympus IX83 TIRF/dSTORM (Rm. 226): $30/час

Обучение работе со всеми приборами, визуализация с оператором и обучение анализу: $125/час

• Конфокальный (4 часа)
• Продвинутое широкое поле (2-3 часа)
• Атомно-силовая микроскопия (4-8 часов)
• Базовое широкое поле (0.5–1 час)
• Визуализация с оператором и обучение анализу (зависит от проекта)

Автономная рабочая станция без посторонней помощи: 5 долларов США в час.