Флуоресцентная микроскопия и визуализация клеток

Микроскопия лежит в основе понимания архитектуры ткани, структуры и динамики клеток, а также молекулярных функций. Флуоресцентная микроскопия обычно используется для определения пространственной и топологической информации о клетках и тканях. Сложные лазерные сканирующие микроскопические приборы, сверхчувствительные цифровые камеры и специализированные флуоресцентные датчики позволяют визуализировать клеточные события в реальном времени вплоть до молекулярного уровня.

флуоресцентный микроскоп в использовании

Общий ресурс по флуоресцентной микроскопии и визуализации клеток способствует совершенствованию исследований рака, предоставляя современные приборы и программное обеспечение для количественной, многомасштабной и мультимодальной флуоресцентной визуализации.

Повышение качества исследований рака

Изображение NueronsОбщий ресурс по флуоресцентной микроскопии и визуализации клеток помогает исследователям-медикам и исследователям-медикам создавать изображения образцов и публиковать заметные статьи, которые:

  • Выяснить клеточные и молекулярные механизмы рака, иммунологических, инфекционных, метаболических, неврологических и сосудистых заболеваний.
  • Оценить терапевтическую эффективность на клетках и образцах пациентов
  • Испытайте новые нанотехнологии в клеточных анализах
  • Количественно измерить изменения морфологии и патологии тканей

Общий ресурс по флуоресцентной микроскопии и визуализации клеток предоставляет исследователям UNM доступ к современному оборудованию для различных методов флуоресцентной микроскопии и микроскопии в проходящем свете:

  • Лазерные сканирующие одно- и многофотонные микроскопы и системы гиперспектральной визуализации позволяют одновременно визуализировать и количественно определять гистохимические пятна и флуоресцентные метки.
  • Приложения флуоресценции полного внутреннего отражения (TIRF), отслеживания одиночных частиц (SPT) и микроскопии локализации одиночных молекул (SMLM) для количественной оценки динамических событий живых клеток и достижения разрешения ниже дифракционного предела света
  • Ратиометрическая визуализация позволяет количественно определять изменения в реальном времени концентраций кальция и других ионов в ответ на передачу сигналов клетки. 

Общий ресурс по флуоресцентной микроскопии и визуализации клеток имеет ресурсный персонал, который предлагает: следователи:

  • Консультации специалиста по планированию эксперимента и подготовке образцов 
  • Обучение
  • Визуализация за плату
  • Постоянная помощь

Дайан Лидке, доктор философии; Директор факультета

Отделение патологии
2325 Камино де Салуд, CRF203A
Комплексный онкологический центр UNM
Альбукерке, Нью-Мексико 87131
Телефон: (505) 272-8375

Написать д-ру Дайане Лидке

Майкл Паффет, доктор философии; Технический директор

2325 Камино де Салуд, CRF201A
Комплексный онкологический центр UNM
Альбукерке, Нью-Мексико 87131
Телефон: 505-272-1437

Написать доктору Паффету

Кейт Лидке, доктор философии; Специальный советник

Йельский бульвар, 210, северо-восток, 2218
Здание междисциплинарной науки физики и астрономии
Альбукерке, Нью-Мексико 87106
Телефон: (505) 277-2616

Написать д-ру Кейту Лидке

Чтобы подтвердить использование этого общего ресурса, пожалуйста, включите в свои публикации следующее:

Это исследование было частично поддержано грантом NCI P30CA118100 Универсального онкологического центра UNM и использовало общие ресурсы флуоресцентной микроскопии и визуализации клеток.

После публикации, пожалуйста, пришлите нам одну из ваших репринтов или обложек для наших записей.

Измерительные приборы

Расположение: CRF219

Детали системы

  • Индивидуальный инвертированный микроскоп Olympus IX83 с пьезосканирующим столиком Asylum 3D XYZ
  • Мультиспектральная светодиодная лампа Excelitas Turbo (широкое поле) и галогенная лампа (яркое поле)  
  • Масляный иммерсионный объектив 10X/0.3 NA, 20X/0.7 NA и 100X/1.4 NA
  • Монохромная ПЗС-камера Olympus XM10 
  • АСМ-головка Asylum MFP Origin с увеличенным диапазоном перемещений для биологических препаратов
  • Программное обеспечение Asylum Research для управления АСМ
  • Программное обеспечение Olympus CellSens для управления световой микроскопией
  • BioHeater для работы с живыми клетками/тканями
  • Тренировочные зонды предоставляются, пока есть в наличии!
  • Чашки, совместимые с АСМ: нижние камеры с крышкой WillCo (Ted Pella cat # 14025-20) и чашки для культур из полистирола BD Falcon (# 351006)
  • Атомарно-плоские поверхности (слюда или ВОПГ) для сканирования с высоким разрешением можно найти на сайте Ted Pella.com — обращайтесь за помощью.

Возможные применения

  • Режим переменного контакта (AC), также известный как режим постукивания, для визуализации в нанометровом масштабе в сухих или влажных препарах.
  • Режим контакта для измерения механической силы (модуль упругости, адгезия, вдавливание и картирование силы) в сухих или влажных препарациях 

Расположение: CRF216

Детали микроскопа

  • Инвертированный микроскоп Leica DMi8 с моторизованным столиком XY
  • Металлогалогенная люминесцентная лампа и галогенная лампа
  • Объективы 10X, 20X Oil, 25X Water, 63X Water DIC и 63X Oil DIC
  • Лазерное возбуждение для PA-GFP, DAPI, CFP, YFP, FITC, родамина и Cy5-подобных флуорофоров
  • Настраиваемый и импульсный лазер белого света: 470-670 нм
  • Два дополнительных лазера: лазерный диод 405 нм и мультиаргоновый (линии 458, 477, 488, 514 нм)
  • Шесть детекторов: 2 гибридных спектральных детектора * (HyD); 2 Spectral SMD ** HyD, 1 стандартный Spectral PMT и 1 переданный PMT (внешний)
  • Гальво Z-этап
  • Резонансный сканер
  • Модуль флуоресцентной пожизненной микроскопии (FLIM) Pico Harp 300
  • Программное обеспечение для сбора данных LASX
  • SymphoTime64 (PicoQuant) Программное обеспечение FLIM
  • Программное обеспечение Huygens Deconvolution
  • Инкубатор Tokai Hit Stage Top для визуализации живых клеток

* HyD - это специализированные детекторы, использующие фотокатоды GAsP и лавинные фотодиоды.

** Детекторы одиночных молекул (SMD)

Возможные применения

  • Фиксированные образцы, закрепленные на стандартном предметном стекле с покровными стеклами №1.5.
  • Образцы живых клеток (многолуночный LabTekII # 1.5 или дно крышки 35 мм (# 1.5))
  • FLIM FRET (фиксированные или живые клетки)
  • Отбеливание акцепторов FRET (фиксированное)
  • Сенсибилизированная эмиссия FRET (живые клетки)
  • FRAP (живая клетка)
  • 3D-захват (Z-стеки) и покадровая съемка
  • Мультиспектральное разделение
  • Многоплановое сканирование плитки большой площади
  • Сверхразрешение за счет обработки восстановления изображения (~ 130 нм)

Расположение: CRF226

Детали микроскопа

  • Инвертированный микроскоп Zeiss AxioObserver с моторизованным столиком XY
  • Металлогалогенные люминесцентные лампы и галогенные лампы
  • 10x, 20x, 40x масляные, 63x масляные и 63x водные иммерсионные объективы
  • DIC доступен с объективами 10x, 20x, 40x и 63x
  • Лазерное возбуждение для PA-GFP, DAPI, CFP, YFP, FITC, родамина и Cy5-подобных флуорофоров
  • Четыре твердотельных лазера: 405 нм, 488 нм, 561 нм, 640 нм
  • Канальное и спектральное детектирование - детекторы GaAsP PMT
  • Одновременное обнаружение в 3 каналах доступно в режиме канала
  • Матричный детектор Airyscan для увеличения разрешения XY в 1.7 раза
  • Детектор проходящего света
  • Система инкубации живых клеток: контроль температуры, влажности и CO2
  • Программное обеспечение Zen Blue Image Acquisition

Возможные применения

  • Фиксированные образцы, закрепленные на стандартном предметном стекле с покровными стеклами №1.5.
  • Образцы живых клеток (многолуночный LabTekII # 1.5 или дно крышки 35 мм (# 1.5))
  • Отбеливание акцепторов FRET (фиксированное)
  • Сенсибилизированная эмиссия FRET (живые клетки)
  • FRAP (живая клетка)
  • 3D-захват (Z-стеки) и покадровая съемка
  • Мультиспектральное разделение
  • Многоплановое сканирование плитки большой площади
  • Сверхразрешение за счет обработки восстановления изображения (~ 130 нм)

Расположение: CRF226

Детали микроскопа

  • Индивидуальный инвертированный микроскоп Olympus IX83 с моторизованным XY-столиком ASI и пьезо-Z-образной вставкой.
  • Многоспектральный светодиод Excelitas Turbo (широкое поле) и белый светодиод Lumencor (яркое поле)  
  • 20x / 0.8NA масляные, 60x / 1.5NA масляные TIRF, 60x / 1.2NA водяные и масляные 100x / 1.4NA
  • DIC поддерживает оптику 60x и 100x.
  • Olympus Real Time Controller для точной по времени синхронизации камеры и возбуждения
  • 4-х лазерный прожектор MITICO TIRF для независимой глубины проникновения
  • 4 отдельные лазерные линии для TIRF: 405 нм (100 мВт); 488 нм (100 мВт); 561 нм (100 мВт) и 640 нм (140 мВт)
  • Возможна прямая стохастическая оптическая реконструирующая микроскопия (dSTORM), фотоактивированная локализационная микроскопия (PALM) и получение изображений с помощью листов с наклонной ламинарной оптикой (HILO)
  • Камера Hamamatsu Fusion sCMOS и разделитель изображений Geminini W-View для одновременного получения 2-х цветных живых клеток.
  • Не фотодеструктивный ИК-автофокус ZDC2 для чрезвычайно быстрой съемки одного кадра или непрерывной автофокусировки 
  • Нагреватель объективов BiopTechs для кратковременного применения живых клеток
  • Программное обеспечение для получения изображений Olympus cellSens Dimension

Возможные применения

  • Фиксированные образцы с покровными стеклами # 1.5H
  • Образцы живых клеток (LabTekII # 1.5H многолуночный или дно крышки 35 мм (# 1.5H))
  • 3D-захват (Z-стеки) и покадровая съемка
  • Конкретные области применения включают обнаружение одиночных молекул TIRF на живых клетках, HILO, 2D dSTORM или PALM. 
  • Постобработка с поддержкой графического процессора, предоставляемая Huygens Localizer

Расположение камеры: CRF218

Детали микроскопа

  • Инвертированный инвертированный микроскоп Olympus IX-71
  • Люминесцентная лампа ртути и галогенная лампа пропускания
  • Монохроматор - диапазон возбуждения 350-670 нм
  • Лазеры: 405 нм, 488 нм, 520 нм и 642 нм
  • Объективы TIRF 20x, 60x H2O, 100x Oil, 150x Oil
  • Флуоресцентные фильтры для квантовых точек, DAPI, FITC и Rhod-подобных флуорофоров, Fura-2, Indo-1
  • Программное обеспечение Andor IQ Image Acquisition
  • Нагреватель для объективов и система инкубации живых клеток с патологическими устройствами с CO2, теплом, влажностью
  • XYZ моторизованная сцена
  • Andor iXon EM-CCD камера
  • Opti-split (двойной) разделитель изображений

Возможные применения

  • Фиксированный образец на предметных стеклах
  • Визуализация живых клеток с обогревателем объектива
  • Отслеживание отдельных частиц
  • Флуоресценция полного внутреннего отражения (TIRF)
  • Соотношение-метрическая визуализация (двойное возбуждение / одиночное излучение или двойное излучение одиночного возбуждения)
  • Живые клетки в культуре
  • Широкопольная флуоресценция - с монохроматором возможно множество флуорофоров
  • Z-стеки и временные ряды

Расположение камеры: CRF224

Детали микроскопа

  • Прямой микроскоп AxioPlanMOT
  • Металлогалогенная люминесцентная лампа и галогенная лампа
  • 10x, 20x, 40x масляные и 63x масляные объективы
  • Длиннопроходные фильтры DAPI, FITC, Rhodamine, Cy5 для использования с камерой Nuance и спектральной камерой Nuance и программным обеспечением
  • Моторизованная револьверная головка, Z-образная ступень, турель фильтра и заслонка для удобства эксплуатации.

Возможные применения

  • Фиксированный образец на предметных стеклах
  • Широкопольная флуоресценция - образец помечен флуорофорами, подобными DAPI, FITC, Rhod и Cy5.
  • Брайтфилд - H&E, DAB, Giemsa и др.
  • Спектральная камера Nuance может использоваться для разделения близко перекрывающихся флуорофоров, гистохимических пятен, различения автофлуоресценции и количественной оценки мечения.

Расположение камеры: CRF212

Детали микроскопа 

  • Инвертированный флуоресцентный микроскоп Zeiss AxioObserver
  • Монохромная камера Hamamatsu ORCA Flash4.0v2 sCMOS (100 кадров в секунду при полном разрешении 2048x2048)
  • Металлогалогенные люминесцентные лампы и галогенные лампы
  • 10x, 20x, 63xDIC Oil и 100x масляные объективы
  • Фазовый контраст для объективов 10x и 20x
  • Наборы флуоресцентных фильтров включают: DAPI, FITC, Rhodamine / TRITC / Cy3, Texas Red и Cy5.
  • ДИК доступен с объективами 63x
  • Нагреватель объектива (водяной объектив 63x) o Моторизованная насадка для Z-образной укладки
  • Моторизованный столик XY для получения многопозиционных изображений (покадровая съемка с фиксированными или живыми ячейками)
  • ПО для создания изображений SlideBook6

Возможные применения 

  • Фиксированный образец на предметных стеклах
  • Живые клетки в покровном стекле / нагревание с помощью нагревателя объектива
  • ДИК (неконфокальный) с объективами 63x, объединенный с флуоресценцией или отдельно
  • Z-стеки, монтаж и визуализация временных рядов

Расположение камеры: CRF226

Детали микроскопа

  • Прямой микроскоп AxioSkop 2 MOT
  • 4x, 10x, 20x, 40x, 40x масло и 63x масло
  • Фазовый контраст для объективов 10x и 20x
  • Цифровая цветная камера AxioCam HR
  • Программное обеспечение Zeiss AxioVision для получения изображений
  • Моторизованный Z-этап

Возможные применения

  • Фиксированный образец на предметных стеклах для общей гистопатологии
  • Брайтфилд - H&E, DAB, Giemsa и др.

Расположен в CRF224 и CRF226

Программные обеспечения для георадаров

  • Научная объемная визуализация с использованием деконволюции Гюйгенса (1)
  • Слайд-книга (1)
  • СтереоИсследователь (1)
  • Нейролуциды (1)
  • LASX (конфокальный Leica) (1)
  • IQTL (анализ сканера тайфуна) (1)
  • Дзен (2)  
  • ЛСМ510 (2)
  • Программное обеспечение Nuance для получения спектральных изображений (2)

Параметры анализа

  • Совместная локализация
  • деконволюция
  • Спектральное разделение
  • Анализ интенсивности
  • Морфологический анализ
  • 3D рендеринг
  • Подсчет объектов
  • Отслеживание частиц
  • Подготовка к публикации

Расположен в CRF214.

Typhoon FLA 7000 - это быстрый и универсальный лазерный сканер для приложений биомолекулярной визуализации, в том числе:

  • чувствительные и количественные измерения радиоизотопных меток
  • хемифлуоресцентный вестерн-блоттинг
  • одиночная флуоресценция (видимое возбуждение)
  • документирование колориметрических пятен (например, гелей, окрашенных кумасси синим и серебристым)

Расположен в CRF214.

Li-Cor Odessey Fc - это сканер ближнего инфракрасного диапазона (680 нм и 740 нм) для приложений биомолекулярной визуализации, включая:

  • чувствительные и количественные измерения хемилюминесцентных вестерн-блотов
  • документирование колориметрических пятен (например, гелей, окрашенных кумасси синим и серебристым)

Услуги микроскопии включают

  • Консультации специалиста по планированию эксперимента и подготовке образцов
  • Обучение пользователей
  • Визуализация и сбор предварительных данных для заявок на гранты с помощью оператора
  • Ежегодный день открытых дверей для информирования пользователей о новых инструментах, технологиях и приложениях
  • Курс по микроскопии для аспирантов и аспирантов по оптическим и приборным функциям
  • Ежегодные семинары, которые дают новым пользователям практическое обучение методам подготовки образцов.

Приобретение FasLGFP в состоянии покоя_20201113_165
Флуоресцентная микроскопия полного внутреннего отражения (TIRF) базальной экспрессии активности FasL-GFP в клетках RBL

Услуги и расценки на микроскопию

Zeiss AxioSkop - Цветная камера AxioCamHR: 10 долларов в час

Zeiss AxioObserver - Монохромная камера Hamamatsu ORCA Flash4.0v2 sCMOS: 18 долларов в час

Zeiss AxioPlan2 - Многоспектральная камера Nuance: 10 долларов в час

Nikon TE2000 - монохромная камера Q-Imaging Retiga R3: 10 долларов в час

Leica TCS SP8 Confocal с обнаружением одиночных молекул / FLIM: 54 долларов в час

Zeiss LSM 800 AiryScan: 50 долларов в час

Визуализация с отслеживанием отдельных частиц / коэффициентом флуоресценции (Rm. 218): 25 долларов в час

Конфокальная стереологическая система (Rm. 212): $ 30 / час

Атомно-силовая микроскопия (219 рупий): 30 долларов в час.

Эпи-флуоресцентная визуализация: 75 долларов в час.

Конфокальная флуоресцентная визуализация: 100 долларов в час (4 часа)

Микроскоп и спектральная визуализация Olympus: 75 долларов в час (2-6 часов)

Все методы визуализации: 105 долларов в час.

Финансирование фонда

Общий ресурс по флуоресцентной микроскопии Университета Нью-Мексико и онкологического центра выражает признательность за следующие средства на закупку оборудования или поддержку учреждения с момента его открытия в 1999 году.

Текущее финансирование

NCI 2P30 CA118100 (PI Willman, C.) «Грант на поддержку онкологического центра UNM» 9 сентября / 25-05 / 8/31

NIGMS 5P50 GM085273 (PI Wilson, BS) «Центр пространственно-временного моделирования сетей передачи сигналов ячеек (STMC)» 08-01 / 08/07

STMC P50GM085273: финансовая поддержка Leica TCS-SP8 и Olympus iX71

Прошлое финансирование КИП

NCRR 1 S10 RR14668 (П.И. Вандингер-Несс, А.) «Конфокальный микроскоп Zeiss LSM510 для исследований в области здравоохранения» 04/01 / 00-03 / 31/01

NSF MCB9982161 (П.И. Вандингер-Несс, А.) «Rab7 и функция дополнительных белков при позднем эндоцитозе» (покупка цифровой камеры Hamamatsu для визуализации живых клеток) 04-01.

NCRR S10 RR016918 (П.И. Вандингер-Несс, А.) «Zeiss Axiovert 200 для проекта визуализации живых клеток» 08/01 / 02-04 / 01/04

NCRR S10 RR19287 (П. И. Вандингер-Несс, А.) «Детектор МЕТА и лазер 405 нм» 04/01/04/03/31

NCRR 1S10RR025540 (П.И. Вандингер-Несс, А., соавтор Ли, Р.) «Конфокальный стереологический микроскоп для ядра флуоресцентной микроскопии UNM» ARRA 05/01 / 09-03 / 31/10

NSF DGE-0549500 (П.И. Осински, M. co-I, Oliver Co-PI) «Нанотехнологии для клеточной биологии и нейробиологии» (покупка аксессуаров для Olympus IX71) 6/15 / 06-5 / 31/11

Фонд семьи Мэтьюза (PI Lee, R.) «Система спектральной визуализации Nuance, Cri» 01/01 / 09-12 / 31 / -09

NIDDK 3R301 DK050141 (П.И. Вандингер-Несс, А.) «Патологические механизмы поликистозной болезни почек», приобретение Zeiss Axio Observer за 510 МЕТА) Административное приложение ARRA 09/30 / 09-09 / 29/11

NCRR P20 RR11830 (П.И. Оливер, Дж., Соучредитель Итон, П.) «Улучшение междисциплинарных исследований в Нью-Мексико» 9 - 30

NCI R24 CA88339 (П. И. Склар, Л.) «Общий ресурс для исследований рака UNM» 07/01 / 00-06 / 30/05

NCI P20 CA88807 (П.И. Уиллман, К.) «Грант на планирование онкологического центра Университета Нью-Мексико» 07/01 / 00-06 / 30/05

Внутреннее финансирование с 1999 г. по настоящее время: 437,266 XNUMX долл. США

Центр медицинских наук Университета Нью-Мексико

Онкологический центр Университета Нью-Мексико

Медицинский факультет Университета Нью-Мексико, отделение патологии