Расширенная световая микроскопия
Совместный ресурс Advanced Light Microscopy поддерживает фундаментальные и трансляционные исследования рака, предоставляя членам UNMCCC и пользователям, не являющимся членами, доступ к современному оборудованию и программному обеспечению для количественной, многомасштабной и многомодальной флуоресцентной визуализации.
Общий ресурс Advanced Light Microscopy предоставляет доступ к семи коммерческим приборам для флуоресцентной, фазовой или светлопольной визуализации, а также к нескольким программным платформам для анализа изображений.
Кроме того, члены UNMCCC имеют доступ к Центру многомасштабной микрокопии (MMC), которым руководит доктор Кейт Лидке, где размещены передовые и перспективные приборы для микроскопии отдельных молекул, микроскопии сверхвысокого разрешения, гиперспектральной микроскопии и микроскопии светового листа. MMC также поддерживает доктор Майкл Уэстер, эксперт в области анализа изображений. Это партнерство предоставляет членам UNMCCC технологии, недоступные в других онкологических центрах, и возможность разрабатывать новые подходы к визуализации и анализу, направленные на решение актуальных вопросов биологии рака.
Повышение качества исследований рака
Общий ресурс Advanced Light Microscopy помогает исследователям-практикам и врачам получать изображения образцов и публиковать высококлассные статьи, которые:
- Выяснить клеточные и молекулярные механизмы рака, иммунологических, инфекционных, метаболических, неврологических и сосудистых заболеваний.
- Оценить терапевтическую эффективность на клетках и образцах пациентов
- Испытайте новые нанотехнологии в клеточных анализах
- Количественно измерить изменения морфологии и патологии тканей
Ресурс Advanced Light Microscopy предоставляет исследователям UNM доступ к самым современным приборам для методов множественной флуоресцентной микроскопии и микроскопии в проходящем свете:
- Лазерные сканирующие одно- и многофотонные микроскопы и системы гиперспектральной визуализации позволяют одновременно визуализировать и количественно определять гистохимические пятна и флуоресцентные метки.
- Приложения флуоресценции полного внутреннего отражения (TIRF), отслеживания одиночных частиц (SPT) и микроскопии локализации одиночных молекул (SMLM) для количественной оценки динамических событий живых клеток и достижения разрешения ниже дифракционного предела света
- Ратиометрическая визуализация позволяет количественно определять изменения в реальном времени концентраций кальция и других ионов в ответ на передачу сигналов клетки.
В ресурсе Advanced Light Microscopy Shared Resource есть специалисты, которые предлагают следователи:
- Консультации специалиста по планированию эксперимента и подготовке образцов
- Обучение
- Визуализация за плату
- Постоянная помощь
Дайан Лидке, доктор философии; Директор факультета
Отделение патологии
2325 Камино де Салуд, CRF203A
Комплексный онкологический центр UNM
Альбукерке, Нью-Мексико 87131
Телефон: (505) 272-8375
Кейт Лидке, доктор философии; Специальный советник
Йельский бульвар, 210, северо-восток, 2218
Здание междисциплинарной науки физики и астрономии
Альбукерке, Нью-Мексико 87106
Телефон: (505) 277-2616
Чтобы подтвердить использование этого общего ресурса, пожалуйста, включите в свои публикации следующее:
Данное исследование было частично поддержано грантом NCI P30CA118100 на поддержку Комплексного онкологического центра Университета Нью-Мексико и использовало общий ресурс Advanced Light Microscopy.
После публикации, пожалуйста, пришлите нам одну из ваших репринтов или обложек для наших записей.
Измерительные приборы
Расположение: CRF212
Детали микроскопа
- Изготовленный на заказ инвертированный микроскоп Olympus IX83 со сверхбыстрым моторизованным XY-предметом Martzhauzer с пьезо-Z-вставкой.
- Мультиспектральный светодиод Cool LED PE-300Ultra LED (широкое поле) и светодиод Lumencor PEKA (яркое поле)
- Силиконовое масло 10X/0.4NA, 30X/1.05NA, силиконовое масло 40X/1.25NA, силиконовое масло 60X/1.3NA, силиконовое масло 100x/1.35NA
- DIC поддерживает оптику с увеличением от 30 до 100 раз.
- Olympus Real Time Controller для точной по времени синхронизации камеры и возбуждения
- Вращающаяся дисковая головка с двойной камерой Yokogawa CSU-W1 и устройством смены магнитов SD-SR 3X
- Утонченные sCMOS-камеры Hamamatsu ORCA-Fusion третьего поколения
- 4 отдельные лазерные линии OBIS: 405 нм (50 мВт); 488 нм (100 мВт); 561 нм (100 мВт) и 640 нм (100 мВт)
- 4-цветное изображение (2 канала одновременно) Эмиссионные фильтры на полувысоте: синий (447/60); ЗЕЛЕНЫЙ (525/50); RED 607/36 и Far RED (685/40)
- Неразрушающая фотосъёмка ИК-автофокусировка ZDC2 для чрезвычайно быстрой одиночной или непрерывной автофокусировки
- Верхний инкубатор для визуализации живых клеток Tokai Hit WSKMX
- Программное обеспечение для получения изображений Olympus cellSens Dimension
- Постобработка с поддержкой графического процессора, предоставляемая Huygens Essentials для восстановления изображений (деконволюция)
Возможные применения
- Высокоскоростная многомерная визуализация живых клеток в случаях, когда фототоксичность вызывает беспокойство
- 3D-съемка, замедленная съемка и мозаика
- Объемные образцы, такие как сфероиды/органоиды, рыбки данио и эмбрионы дрозофилы.
Расположение: CRF219
Детали системы
- Индивидуальный инвертированный микроскоп Olympus IX83 с пьезосканирующим столиком Asylum 3D XYZ
- Мультиспектральная светодиодная лампа Excelitas Turbo (широкое поле) и галогенная лампа (яркое поле)
- Масляный иммерсионный объектив 10X/0.3 NA, 20X/0.7 NA и 100X/1.4 NA
- Монохромная ПЗС-камера Olympus XM10
- АСМ-головка Asylum MFP Origin с увеличенным диапазоном перемещений для биологических препаратов
- Программное обеспечение Asylum Research для управления АСМ
- Программное обеспечение Olympus CellSens для управления световой микроскопией
- BioHeater для работы с живыми клетками/тканями
- Тренировочные зонды предоставляются, пока есть в наличии!
- Чашки, совместимые с АСМ: нижние камеры с крышкой WillCo (Ted Pella cat # 14025-20) и чашки для культур из полистирола BD Falcon (# 351006)
- Атомарно-плоские поверхности (слюда или ВОПГ) для сканирования с высоким разрешением можно найти на сайте Ted Pella.com — обращайтесь за помощью.
Возможные применения
- Режим переменного контакта (AC), также известный как режим постукивания, для визуализации в нанометровом масштабе в сухих или влажных препарах.
- Режим контакта для измерения механической силы (модуль упругости, адгезия, вдавливание и картирование силы) в сухих или влажных препарациях
Расположение: CRF216
Детали микроскопа
- Инвертированный микроскоп Leica DMi8 с моторизованным столиком XY
- Металлогалогенная люминесцентная лампа и галогенная лампа
- Объективы 10X, 20X Oil, 25X Water, 63X Water DIC и 63X Oil DIC
- Лазерное возбуждение для PA-GFP, DAPI, CFP, YFP, FITC, родамина и Cy5-подобных флуорофоров
- Настраиваемый и импульсный лазер белого света: 470-670 нм
- Два дополнительных лазера: лазерный диод 405 нм и мультиаргоновый (линии 458, 477, 488, 514 нм)
- Шесть детекторов: 2 гибридных спектральных детектора * (HyD); 2 Spectral SMD ** HyD, 1 стандартный Spectral PMT и 1 переданный PMT (внешний)
- Гальво Z-этап
- Резонансный сканер
- Модуль флуоресцентной пожизненной микроскопии (FLIM) Pico Harp 300
- Программное обеспечение для сбора данных LASX
- SymphoTime64 (PicoQuant) Программное обеспечение FLIM
- Программное обеспечение Huygens Deconvolution
- Инкубатор Tokai Hit Stage Top для визуализации живых клеток
* HyD - это специализированные детекторы, использующие фотокатоды GAsP и лавинные фотодиоды.
** Детекторы одиночных молекул (SMD)
Возможные применения
- Фиксированные образцы, закрепленные на стандартном предметном стекле с покровными стеклами №1.5.
- Образцы живых клеток (многолуночный LabTekII # 1.5 или дно крышки 35 мм (# 1.5))
- FLIM FRET (фиксированные или живые клетки)
- Отбеливание акцепторов FRET (фиксированное)
- Сенсибилизированная эмиссия FRET (живые клетки)
- FRAP (живая клетка)
- 3D-захват (Z-стеки) и покадровая съемка
- Мультиспектральное разделение
- Многоплановое сканирование плитки большой площади
- Сверхразрешение за счет обработки восстановления изображения (~ 130 нм)
Расположение: CRF226
Детали микроскопа
- Инвертированный микроскоп Zeiss AxioObserver с моторизованным столиком XY
- Металлогалогенные люминесцентные лампы и галогенные лампы
- 10x, 20x, 40x масляные, 63x масляные и 63x водные иммерсионные объективы
- DIC доступен с объективами 10x, 20x, 40x и 63x
- Лазерное возбуждение для PA-GFP, DAPI, CFP, YFP, FITC, родамина и Cy5-подобных флуорофоров
- Четыре твердотельных лазера: 405 нм, 488 нм, 561 нм, 640 нм
- Канальное и спектральное детектирование - детекторы GaAsP PMT
- Одновременное обнаружение в 3 каналах доступно в режиме канала
- Матричный детектор Airyscan для увеличения разрешения XY в 1.7 раза
- Детектор проходящего света
- Система инкубации живых клеток: контроль температуры, влажности и CO2
- Программное обеспечение Zen Blue Image Acquisition
Возможные применения
- Фиксированные образцы, закрепленные на стандартном предметном стекле с покровными стеклами №1.5.
- Образцы живых клеток (многолуночный LabTekII # 1.5 или дно крышки 35 мм (# 1.5))
- Отбеливание акцепторов FRET (фиксированное)
- Сенсибилизированная эмиссия FRET (живые клетки)
- FRAP (живая клетка)
- 3D-захват (Z-стеки) и покадровая съемка
- Мультиспектральное разделение
- Многоплановое сканирование плитки большой площади
- Сверхразрешение за счет обработки восстановления изображения (~ 130 нм)
Расположение: CRF226
Детали микроскопа
- Индивидуальный инвертированный микроскоп Olympus IX83 с моторизованным XY-столиком ASI и пьезо-Z-образной вставкой.
- Многоспектральный светодиод Excelitas Turbo (широкое поле) и белый светодиод Lumencor (яркое поле)
- 20x / 0.8NA масляные, 60x / 1.5NA масляные TIRF, 60x / 1.2NA водяные и масляные 100x / 1.4NA
- DIC поддерживает оптику 60x и 100x.
- Olympus Real Time Controller для точной по времени синхронизации камеры и возбуждения
- 4-х лазерный прожектор MITICO TIRF для независимой глубины проникновения
- 4 отдельные лазерные линии для TIRF: 405 нм (100 мВт); 488 нм (100 мВт); 561 нм (100 мВт) и 640 нм (140 мВт)
- Возможна прямая стохастическая оптическая реконструирующая микроскопия (dSTORM), фотоактивированная локализационная микроскопия (PALM) и получение изображений с помощью листов с наклонной ламинарной оптикой (HILO)
- Камера Hamamatsu Fusion sCMOS и разделитель изображений Geminini W-View для одновременного получения 2-х цветных живых клеток.
- Не фотодеструктивный ИК-автофокус ZDC2 для чрезвычайно быстрой съемки одного кадра или непрерывной автофокусировки
- Нагреватель объективов BiopTechs для кратковременного применения живых клеток
- Программное обеспечение для получения изображений Olympus cellSens Dimension
Возможные применения
- Фиксированные образцы с покровными стеклами # 1.5H
- Образцы живых клеток (LabTekII # 1.5H многолуночный или дно крышки 35 мм (# 1.5H))
- 3D-захват (Z-стеки) и покадровая съемка
- Конкретные области применения включают обнаружение одиночных молекул TIRF на живых клетках, HILO, 2D dSTORM или PALM.
- Постобработка с поддержкой графического процессора, предоставляемая Huygens Localizer
Расположение камеры: CRF218
Детали микроскопа
- Инвертированный инвертированный микроскоп Olympus IX-71
- Люминесцентная лампа ртути и галогенная лампа пропускания
- Монохроматор - диапазон возбуждения 350-670 нм
- Лазеры: 405 нм, 488 нм, 520 нм и 642 нм
- Объективы TIRF 20x, 60x H2O, 100x Oil, 150x Oil
- Флуоресцентные фильтры для квантовых точек, DAPI, FITC и Rhod-подобных флуорофоров, Fura-2, Indo-1
- Программное обеспечение Andor IQ Image Acquisition
- Нагреватель для объективов и система инкубации живых клеток с патологическими устройствами с CO2, теплом, влажностью
- XYZ моторизованная сцена
- Andor iXon EM-CCD камера
- Opti-split (двойной) разделитель изображений
Возможные применения
- Фиксированный образец на предметных стеклах
- Визуализация живых клеток с обогревателем объектива
- Отслеживание отдельных частиц
- Флуоресценция полного внутреннего отражения (TIRF)
- Соотношение-метрическая визуализация (двойное возбуждение / одиночное излучение или двойное излучение одиночного возбуждения)
- Живые клетки в культуре
- Широкопольная флуоресценция - с монохроматором возможно множество флуорофоров
- Z-стеки и временные ряды
Расположение камеры: CRF212
Детали микроскопа
- Инвертированный флуоресцентный микроскоп Zeiss AxioObserver
- Монохромная камера Hamamatsu ORCA Flash4.0v2 sCMOS (100 кадров в секунду при полном разрешении 2048x2048)
- Металлогалогенные люминесцентные лампы и галогенные лампы
- 10x, 20x, 63xDIC Oil и 100x масляные объективы
- Фазовый контраст для объективов 10x и 20x
- Наборы флуоресцентных фильтров включают: DAPI, FITC, Rhodamine / TRITC / Cy3, Texas Red и Cy5.
- ДИК доступен с объективами 63x
- Нагреватель объектива (водяной объектив 63x) o Моторизованная насадка для Z-образной укладки
- Моторизованный столик XY для получения многопозиционных изображений (покадровая съемка с фиксированными или живыми ячейками)
- ПО для создания изображений SlideBook6
Возможные применения
- Фиксированный образец на предметных стеклах
- Живые клетки в покровном стекле / нагревание с помощью нагревателя объектива
- ДИК (неконфокальный) с объективами 63x, объединенный с флуоресценцией или отдельно
- Z-стеки, монтаж и визуализация временных рядов
Расположен в CRF219A
ПРОГРАММНОЕ ОБЕСПЕЧЕНИЕ
- Деконволюция Гюйгенса для получения научных объемных изображений
- LASX (конфокальная микроскопия Leica)
- Карл Цейсс Дзен
- Olympus/Evident cellSens
Параметры анализа
- Совместная локализация
- деконволюция
- Спектральное разделение
- Анализ интенсивности
- Морфологический анализ
- 3D рендеринг
- Подсчет объектов
- Отслеживание частиц
- Подготовка к публикации
Услуги микроскопии включают
- Консультации специалиста по планированию эксперимента и подготовке образцов
- Обучение пользователей
- Визуализация и сбор предварительных данных для заявок на гранты с помощью оператора
- Ежегодный день открытых дверей для информирования пользователей о новых инструментах, технологиях и приложениях
- Курс по микроскопии для аспирантов и аспирантов по оптическим и приборным функциям
- Ежегодные семинары, которые дают новым пользователям практическое обучение методам подготовки образцов.
Приобретение FasLGFP в состоянии покоя_20201113_165
Флуоресцентная микроскопия полного внутреннего отражения (TIRF) базальной экспрессии активности FasL-GFP в клетках RBL
Услуги и расценки на микроскопию
Zeiss AxioObserver - Монохромная камера Hamamatsu ORCA Flash4.0v2 sCMOS: 8 долларов в час
Evident/Olympus IX83-Yokogawa Spinning Disk: 35 долларов в час
Leica TCS-SP8/FLIM: 43 $ / час
Цейсс LSM800: 41 $ / час
Olympus IX71 Single Particle Tracking/Ratio-Metric Microscope (Rm. 218): $26/час
Микроскоп Olympus IX83 TIRF/dSTORM (Rm. 226): $30/час
Обучение работе со всеми приборами, визуализация с оператором и обучение анализу: $128/час
- Конфокальный (4 часа)
- Продвинутое широкое поле (2-3 часа)
- Атомно-силовая микроскопия (4-8 часов)
- Базовое широкое поле (0.5–1 час)
- Визуализация с оператором и обучение анализу (зависит от проекта)
Автономная рабочая станция без посторонней помощи: 5 долларов США в час.
Финансирование фонда
Совместный ресурс усовершенствованной световой микроскопии Университета Нью-Мексико и онкологического центра UNM выражает благодарность за следующее финансирование приобретения оборудования или поддержки учреждения с момента его открытия в 1999 году.
Текущее финансирование
NCI 2P30 CA118100 (PI Willman, C.) «Грант на поддержку онкологического центра UNM» 9 сентября / 25-05 / 8/31
NIGMS 5P50 GM085273 (PI Wilson, BS) «Центр пространственно-временного моделирования сетей передачи сигналов ячеек (STMC)» 08-01 / 08/07
STMC P50GM085273: финансовая поддержка Leica TCS-SP8 и Olympus iX71
Прошлое финансирование КИП
NCRR 1 S10 RR14668 (П.И. Вандингер-Несс, А.) «Конфокальный микроскоп Zeiss LSM510 для исследований в области здравоохранения» 04/01 / 00-03 / 31/01
NSF MCB9982161 (П.И. Вандингер-Несс, А.) «Rab7 и функция дополнительных белков при позднем эндоцитозе» (покупка цифровой камеры Hamamatsu для визуализации живых клеток) 04-01.
NCRR S10 RR016918 (П.И. Вандингер-Несс, А.) «Zeiss Axiovert 200 для проекта визуализации живых клеток» 08/01 / 02-04 / 01/04
NCRR S10 RR19287 (П. И. Вандингер-Несс, А.) «Детектор МЕТА и лазер 405 нм» 04/01/04/03/31
NCRR 1S10RR025540 (П.И. Вандингер-Несс, А., соавтор Ли, Р.) «Конфокальный стереологический микроскоп для ядра флуоресцентной микроскопии UNM» ARRA 05/01 / 09-03 / 31/10
NSF DGE-0549500 (П.И. Осински, M. co-I, Oliver Co-PI) «Нанотехнологии для клеточной биологии и нейробиологии» (покупка аксессуаров для Olympus IX71) 6/15 / 06-5 / 31/11
Фонд семьи Мэтьюза (PI Lee, R.) «Система спектральной визуализации Nuance, Cri» 01/01 / 09-12 / 31 / -09
NIDDK 3R301 DK050141 (П.И. Вандингер-Несс, А.) «Патологические механизмы поликистозной болезни почек», приобретение Zeiss Axio Observer за 510 МЕТА) Административное приложение ARRA 09/30 / 09-09 / 29/11
NCRR P20 RR11830 (П.И. Оливер, Дж., Соучредитель Итон, П.) «Улучшение междисциплинарных исследований в Нью-Мексико» 9 - 30
NCI P20 CA88807 (П.И. Уиллман, К.) «Грант на планирование онкологического центра Университета Нью-Мексико» 07/01 / 00-06 / 30/05
Внутреннее финансирование с 1999 г. по настоящее время: 437,266 XNUMX долл. США
Центр медицинских наук Университета Нью-Мексико
Онкологический центр Университета Нью-Мексико
Медицинский факультет Университета Нью-Мексико, отделение патологии